СПЕСЕРА ТЕСТ КАСЕТА РОТА АДЕНОВИРУС

Комбиниран бърз тест за ротавирус и аденовирус (касета)

(Фецес)
ПРЕДВИДЕНА УПОТРЕБА

Бързият комбиниран тест за ротавируси и аденовируси (фецес) е бърз визуален имунологичен тест за качествено потенциално откриване на ротавируси и аденовируси в човешки фекални проби. Този комплект е предназначен за употреба като помощно средство при диагностицирането на ротавирусна и аденовирусна инфекция.

ВЪВЕДЕНИЕ:

Ротавирусът е най-честият причинител на остър гастроентерит, предимно при малки деца. Откриването му през 1973 г. и свързването му с детския гастроентерит представлява много важен напредък в изучаването на гастроентерита, който не е причинен от остра бактериална инфекция. Ротавирусът се предава по фекално-орален път с инкубационен период от 1-3 дни. Въпреки че пробите, взети на втория и петия ден от заболяването, са много подходящи за откриване на антигени, ротавирусът може да бъде открит и при продължителна диария. Ротавирусният гастроентерит може да доведе до летален изход за рискови групи от населението, като бебета, възрастни хора и пациенти с понижен имунитет. В районите с умерен климат ротавирусните инфекции се появяват главно през зимните месеци. Съобщавано е за ендемии, както и за епидемии, засягащи няколко хиляди души. При хоспитализирани деца, боледуващи от остро ентрично заболяване, до 50% от анализираните проби са положителни за ротавирус. Вирусите се реплицират в
клетъчното ядро и обикновено са видово специфични за гостоприемника, като предизвикват характерен цитопатогенен ефект (CPE). Тъй като ротавирусът се култивира изключително трудно, при диагностицирането на инфекцията обикновено не се използва изолиране на вируса. Вместо това са разработени различни техники за откриване на ротавирус в в проба фецес.
Острото диарийно заболяване при малките деца е основна причина за заболяемостта в световен мащаб и е водеща причина за смъртността в развиващите се страни. Проучванията показват, че чревните аденовируси, предимно Ad40 и Ad41, са основна причина за диария при голяма част от тези деца, на второ място след ротавирусите. Тези вирусни патогени се изолират по целия свят и могат целогодишно да бъдат
причинители на диария при децата. Най-често инфекциите се наблюдават при деца на възраст под две години, но са откривани при пациенти от всички възрасти. Допълнителни проучвания показват, че аденовирусите са свързани с 4-15% от всички случаи на хоспитализирани пациенти с вирусен гастроентерит.
Бързото и точно диагностициране на гастроентерит, причинен от аденовирус, е от помощ при установяването на етиологията на гастроентерита и свързаното с нея лечение на пациента. Другите диагностични техники, като електронна микроскопия (ЕМ) и хибридизация на нуклеинови киселини, са скъпи и трудоемки. Предвид самоограничаващия се характер на аденовирусната инфекция, такива скъпи и
трудоемки тестове може да не са необходими.

ПРИНЦИП

Бързият комбиниран тест за ротавирус и аденовирус (фецес) е разработен за откриване на ротавирус и аденовирус чрез визуална идентификация на промяната на цвета във вътрешната лента. В тестовата област мембраната е имобилизирана с антиротавирусни антитела и антиаденовирусни антитела. По време на теста пробата се оставя да реагира с оцветени латексни конюгати на антиротавирусни антитела и
латексни конюгати на антиаденовирусни антитела, които са предварително нанесени върху тампона на теста. След това сместа се насочва по мембрана чрез капилярно движение и взаимодейства с реагентите върху мембраната. Ако в пробите се съдържа достатъчно количество ротавируси, в областта R на мембраната ще оформи цветна ивица. По същия начин, ако в пробите се съдържа достатъчно количество аденовируси, в областта А на мембраната ще се образува цветна лента. Наличието на цветна(и) ивица(и) показва положителен резултат, а отсъствието ѝ - отрицателен резултат. Появата на цветна ивица в контролната област служи като контрола на процедурата. Това показва, че е добавен подходящият обем проба и е настъпило адекватно абсорбиране на течността от мембраната.

ПРЕДОСТАВЕНИ МАТЕРИАЛИ

1. Тест касета

2. Комплект за пробовземане на фецес

3. Изсушител

4. Листовка

МАТЕРИАЛИ, КОИТО СА НЕОБХОДИМИ, НО НЕ СА ПРЕДОСТАВЕНИ

1. Часовник или таймер

2. Контейнери за съхранение на проби

ПРЕДПАЗНИ МЕРКИ

 Само за професионална in vitro диагностика.
 Да не се използва след изтичане на срока на годност, посочен върху опаковката. Не използвайте теста,
ако фолиевата му опаковка е повредена. Не използвайте тестовете повторно.
 Този комплект съдържа продукти от животински произход. Удостовереното познаване на произхода и/или санитарното състояние на животните не гарантира напълно отсъствието на трансмисивни патогенни агенти. Поради тази причина е препоръчително тези продукти да се третират като потенциално инфекциозни и да се борави с тях, като се спазват обичайните предпазни мерки (да не се поглъщат или вдишват).
 Избягвайте кръстосано замърсяване на пробите, като използвате нов контейнер за съхранение на проби за всяка получена проба.
 Прочетете внимателно цялата инструкция, преди да извършите каквито и да било тестове.
 Не употребявайте храна, напитки и не пушете в зоната, в която се работи с пробите и комплектите.
Работете с всички проби, сякаш съдържат инфекциозни агенти. Спазвайте установените предпазни мерки срещу микробиологични рискове по време на процедурата и следвайте стандартните процедури за правилно изхвърляне на пробите. При изследването на пробите носете защитно облекло, като
лабораторни престилки, ръкавици за еднократна употреба и предпазни средства за очите.
 Не разменяйте и не смесвайте реактиви от различни партиди.
 Влажността и температурата могат да повлияят неблагоприятно на резултатите.
 Използваните тестове трябва да се изхвърлят в съответствие с местните, щатските и/или федералните
разпоредби.

СЪХРАНЕНИЕ И СТАБИЛНОСТ

 Комплектът трябва да се съхранява при температура 2-30°C до изтичане на срока на годност, отпечатан върху неотворената опаковка.
 Тестът трябва да остане в запечатаната опаковка до употребата му.
 Да не се замразява.
 Трябва да се вземат мерки за защита от замърсяване на компонентите в този комплект. Не използвайте, ако има данни за микробно замърсяване или преципитация. Биологичното замърсяване на оборудването за дозиране, контейнерите или реагентите може да доведе до получаване на неверни
резултати.

СЪБИРАНЕ И СЪХРАНЕНИЕ НА ПРОБИТЕ

 Бързият комбиниран тест за ротавируси и аденовируси (фецес) е предназначен само за изследване на човешки фекални проби.
 Откриваемостта на вируса се подобрява, като пробите се вземат непосредствено след появата на симптомите. Съобщава се, че максималната екскреция на ротавирус в екскрементите на пациенти с гастроентерит настъпва 3-5 дни след появата на симптомите. Ако пробите са взети доста време след появата на диарийните симптоми, количеството антиген може да не е достатъчно за получаване на положителна реакция или откритите антигени може да не са свързани с диарийния епизод.
 Извършете изследването веднага след вземането на пробата. Не оставяйте пробите на стайна температура за продължителни периоди. Пробите могат да се съхраняват при температура 2-8°С за период до 72 часа.
 Темперирайте пробите до стайна температура преди тестването.
 В случай че се налага пробите да бъдат изпратени в друга лаборатория е необходимо да ги опакова в
съответствие с приложимите разпоредби за транспортиране на етиологични агенти.

ПРОЦЕДУРА

Преди употреба тестовете, пробите, буферът и/или контролите трябва да са темперирани на стайна температура (15-30 °C).
1. Вземане на проби и предварителна обработка:
1) Най-добри резултати ще се получат, ако анализът се извърши в рамките на 6 часа след вземането.
2) За твърдотелни проби: Развийте и извадете апликатора на епруветката за разреждане. Внимавайте
да не разлеете или разпръснете разтвора от епруветката. Вземете пробите, като въведете накрайника на апликатора в поне 3 различни места на екстремента, за да съберете приблизително 50 mg фецес (еквивалентни на 1/4 грахово зърно).
За течни проби: Хванете пипетата вертикално, аспирирайте фекалните проби и след това прехвърлете 2 капки (приблизително 50 µL) в епруветката за събиране на проби, съдържаща екстракционния буфер.
3) Поставете апликатора обратно в епруветката и завийте плътно капачката. Внимавайте да не пречупите върха на епруветката за разреждане.
4) Разклатете енергично епруветката за събиране на проби, за да смесите пробата и екстракционния буфер. Пробите, приготвени в епруветката за събиране на проби, могат да се съхраняват в продължение на 6 месеца при -20 °C, ако не бъдат изследвани в рамките на 1 час след приготвянето им.
2. Тестване
1) Извадете теста от запечатаната опаковка и го поставете върху чиста, равна повърхност.

Етикетирайте теста с идентификацията на пациента или контролата. За да се получи най-добър резултат, тестът трябва да се направи в рамките на един час след разопаковането.
2) С помощта на парче хартия пречупете върха на епруветката за разреждане. Задръжте епруветката вертикално и дозирайте 2 капки от разтвора в ямката за проби (S) на тестовото оборудване.
Избягвайте образуването на въздушни мехурчета в ямката за проби (S) и не допускайте попадане на разтвор в прозорчето за наблюдение.
Когато тестът започне да действа, ще видите как цветът се променя през мембраната.
3. Изчакайте да се появи цветната(ите) ивица(и). Резултатът трябва да се прочете след 10 минути. Не разчитайте резултата след 15 минути.
Забележка: Ако пробата не мигрира (наличие на частици), центрофугирайте екстрахираните проби, съдържащи се във флакона с екстракционен буфер. Вземете 80 µl от супернатанта, разпределете го в ямката за проби (S) на новото тестово оборудване и започнете наново, като следвате инструкциите, посочени по-горе.

ТЪЛКУВАНЕ НА РЕЗУЛТАТИТЕ

ПОЛОЖИТЕЛЕН:
Положителен за ротавирус: В областта на линията на контролата (С) се появява една цветна ивица, а в областта на линията R - друга цветна ивица.
Положителен за аденовирус: В областта на линията на контролата (С) се появява една цветна ивица, а в областта на линията А - друга цветна ивица.
Положителен за ротавирус и аденовирус: В областта на линията на контролата (С) се появява една цветна ивица, а други две цветни ивици се появяват съответно в областта на линията R и линията A.

ОТРИЦАТЕЛЕН: В областта на линията на контролата (С) се появява само една оцветена ивица. В областта на линиите на теста (A и R) не се появява никаква ивица.

НЕВАЛИДЕН: Ивицата на контролата не се появява. Резултатите от всеки тест, при който не се е появила контролната ивица в определеното време на отчитане, трябва да бъдат отхвърлени. Прегледайте процедурата и повторете теста с нов тестов комплект. Ако проблемът продължава, незабавно преустановете използването на тестовия комплект и се свържете с местния дистрибутор.

ЗАБЕЛЕЖКА:
1. Най-вероятните причини за липсата на контролната ивица са недостатъчният обем на пробата, неправилната процедура на работа или извършването на тестове с изтекъл срок на годност.

КОНТРОЛ НА КАЧЕСТВОТО

 В теста са включени вътрешни процедурни контроли. Оцветена ивица, появяваща се в областта на линията на контролата (В), се счита за вътрешна положителна процедурна контрола. Това потвърждава достатъчния обем на пробата и правилната процедурна техника.
 В този комплект не са включени външни контроли. Като добра лабораторна практика се препоръчва да се тестват положителни и отрицателни контроли, за да се потвърди процедурата на теста и да се провери правилното изпълнение на теста.

ОГРАНИЧЕНИЯ ПО ОТНОШЕНИЕ НА ТЕСТА

1. Бързият комбиниран тест за ротавируси и аденовируси (фецес) е предназначен за професионална инвитро диагностична употреба и трябва да се използва само за качествено откриване на ротавируси и аденовируси.
2. Както при всички диагностични тестове, окончателната клинична диагноза не трябва да се основава на резултата от единичния тест, а трябва да бъде поставена от лекаря само след като са оценени всички клинични и лабораторни резултати.
3. Ако резултатът от теста е отрицателен, а клиничните симптоми продължават, е препоръчително да се направи допълнително изследване с други клинични методи. Отрицателният резултат в никакъв случай не изключва възможността за ротавирусна инфекция или аденовирусна инфекция с ниска концентрация на вирусните частици.

ЕКСПЛОАТАЦИОННИ ХАРАКТЕРИСТИКИ
Таблица: Бърз тест за ротавирус спрямо латексна аглутинация
Относителна чувствителност: 99.1%
(96.8%-99.9%)*
Относителна специфичност: >99.9%
(97.7%-100.0%)*
Обща съгласуваност на
параметрите: 99.5% (98.1%-99.9%)*
*95% Доверителен интервал:

Ротавирус
Бърз тест
Общо
+ -

Латексна
аглутинация
+ 224 2 226
- 0 156 156
Общо 224 158 382
Таблица: Бърз тест за аденовирус спрямо латексна аглутинация
Относителна чувствителност:
>99.9% (95.6%-99.9%)*
Относителна специфичност: 99.4%
(96.5%-99.9%)*
Обща съгласуваност на
параметрите: 99.6% (97.7%-99.9%)*
*95% Доверителен интервал:

Аденовирус
Бърз тест
Общо
+ -

Латексна
аглутинация
+ 82 0 82
- 1 156 157
Общо 83 156 239

Специфичност:
Кръстосаната реактивност със следните организми е изследвана при 1,0 x 109 организми/ml. При
изследване с комбинирания бърз тест за ротавируси и аденовируси (фецес) е установено, че следните
организми са отрицателни.
Staphylococcus aureus Proteus mirabilis Neisseria gonorrhea
Pseudomonas aeruginosa Acinetobacter spp Group B Streptococcus
Enterococcus faecalis Salmonella choleraesius Proteus vulgaris
Group C Streptococcus Gardnerella vaginalis Enterococcus faecium
Klebsiella pneumoniae Acinetobacter calcoaceticus Hemophilus influenzae
Branhamella catarrhalis E.coli Neisseria meningitidis
Candida albicans Chlamydia trachomatis
ЛИТЕРАТУРНИ ИЗТОЧНИЦИ

1. Wadell, G. Laboratory Diagnosis of Infectious Diseases: Principles and Practices. New York: Springer-Verlag,
Volume II, 1988: 284-300.
2. WILHELMI I, ROMAN E, SANCHEZ-FAUQUIER A. Viruses causing gastroenteritis. Clin Microbiol Infect. April.
2003, vol.9:247-262.
3. Cubitt, WD (1982) Rotavirus Infection: An Unexpected Hazard in Units Caring for the Elderly. Geriatric Medicine
Today 1: 33-38.
4. Wood, D. J., K. Bijlsma, J. C. de Jong, and C. Tonkin. “Evaluation of a Commercial Monoclonal Antibody-Based
Enzyme Immunoassay for Detection of Adenovirus Types 40 and 41 in Stool Specimens.” Journal of Clinical
Microbiology, June 1989; 27(6): 1155-1158.
5. Thomas, Eva. E., D. Roscoe, L. Book, B. Bone, L. Browne, and V. Mah. “The Utility of Latex Agglutination
Assays in the Diagnosis of Pediatric Viral Gastroenteritis.” Am. J. Clin. Pathol. 1994; 101:742-746.